胱天蛋白酶的活化在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著主要作用。FITC-C6-DEVD-FMK提供了在活細(xì)胞中靈敏檢測活化的胱天蛋白酶-3的方便手段。FITC-DEVD-FMK是細(xì)胞滲透性的，無毒的，并且不可逆地結(jié)合到活化的胱天蛋白酶-3在細(xì)胞凋亡。在FITC標(biāo)記的可用于直接檢測活化的胱天蛋白酶的凋亡細(xì)胞可通過熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀，或熒光板讀數(shù)器進(jìn)行。

操作方法

以下協(xié)議僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常規(guī)解決方案胱天蛋白酶測定

1.在DMSO中準(zhǔn)備10 mM的儲(chǔ)備溶液。

2.如下準(zhǔn)備2X半胱天冬酶底物（50 μM）分析溶液：50 μL底物原液，100 μL DTT（1M），400 μL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.將等體積的半胱天冬酶標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時(shí)。

4.使用熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光，或使用酶標(biāo)儀監(jiān)測吸光度。

使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針的細(xì)胞Caspase測定

1.在DMSO中準(zhǔn)備2-5 mM的儲(chǔ)備溶液。

2.根據(jù)需要處理細(xì)胞。

3.通過用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）在Hanks中稀釋DMSO儲(chǔ)備溶液（來自步驟2.1），制備2X滲透性半胱天冬酶底物（20 μM）分析溶液。

4.將等體積的處理過的細(xì)胞與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合（來自步驟2.3），并在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育細(xì)胞至少1小時(shí)。

5.用HHBS清洗細(xì)胞至少一次。

6.通過流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強(qiáng)度。

使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針進(jìn)行細(xì)胞半胱天冬酶測定（僅適用于＃13470-13476）

1.通過向小瓶中加入50 μL DMSO制備250X儲(chǔ)備液。

2.根據(jù)需要處理細(xì)胞。

3.以1：250的比例將250 X DMSO儲(chǔ)備溶液添加到細(xì)胞溶液中（例如2 μL至500 μL細(xì)胞），并將細(xì)胞在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育1小時(shí)。

4.用HHBS清洗細(xì)胞至少一次。

5.通過流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強(qiáng)度。