Screen Quest Fluo-8 NW鈣測(cè)定試劑盒提供均勻的熒光測(cè)定，用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣動(dòng)員。表達(dá)通過(guò)鈣發(fā)出信號(hào)的感興趣的GPCR的細(xì)胞預(yù)加載有可以穿過(guò)細(xì)胞膜的Fluo-8 NW。一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)luo-8 NW的親脂性阻斷基團(tuán)被酯酶裂解，導(dǎo)致帶電荷的熒光染料留在細(xì)胞內(nèi)。與鈣結(jié)合后，其熒光大大增強(qiáng)。當(dāng)用激動(dòng)劑刺激細(xì)胞時(shí)，該受體發(fā)出細(xì)胞內(nèi)鈣的釋放信號(hào)，這顯著增加了Fluo-8 NW的熒光。 Fluo-8 NW具有長(zhǎng)波長(zhǎng)，高靈敏度和> 100倍熒光增強(qiáng)的特性，是測(cè)量細(xì)胞鈣的理想指標(biāo)。 Screen Quest Fluo-8 NW鈣測(cè)定試劑盒為監(jiān)測(cè)G蛋白偶聯(lián)受體和鈣通道提供了一種優(yōu)化的檢測(cè)方法。該測(cè)定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并且易于適應(yīng)自動(dòng)化。

樣品分析方案

概述

用含有0.5-1％FBS的Fluo-8 NW染料加載溶液

在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中制備細(xì)胞（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

在室溫下孵育1小時(shí)

監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 525nm處的熒光強(qiáng)度