該試劑盒使用專有染料，可根據線粒體膜電位梯度選擇性累積在線粒體中。線粒體指示劑是一種疏水性化合物，可以很容易地滲透完整的活細胞，并在進入細胞后被困在線粒體中。該熒光線粒體指示劑長時間保留在線粒體中，因為該指示劑攜帶細胞保留組。這一關鍵特征顯著提高了染色效率。標簽協(xié)議是健壯的，需要最少的動手時間。它可以很容易地適用于各種熒光平臺，如微孔板分析，免疫細胞化學和流式細胞術。它適用于多種研究，包括細胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。該試劑盒為所有重要組分提供了優(yōu)化的細胞標記方案。它適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。

樣品分析

1.準備線粒體染色溶液：

1.1將所有組件溫度調至室溫。

1.2通過將20μLMitolite Green（組分A）稀釋到10mL活細胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。

注1：對于一個96孔板，20μL的500X Mitolite Green（組分A）就足夠了。在≤-20oC下等分并儲存未使用的500X Mitolite Green。避光，避免反復凍融循環(huán)。

注2：熒光線粒體指示劑的最佳濃度根據具體應用而變化?？梢愿鶕囟毎愋秃图毎蚪M織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1對于粘附細胞：在96孔黑色墻壁/透明底板上或在裝有適當培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內的蓋玻片上培養(yǎng)細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積（例如對于96孔板為100μL，對于384孔板為25μL）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養(yǎng)基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：以1000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱（37℃）生長培養(yǎng)基中輕輕重懸細胞沉淀，并加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養(yǎng)基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養(yǎng)時間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。