該特定試劑盒設(shè)計(jì)用于在Ex / Em =630/650nm處以大斯托克斯位移的近紅外熒光標(biāo)記活細(xì)胞的溶酶體。該試劑盒使用專有的溶解性染料，可能通過溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中。溶致指示劑，一種疏水性化合物，很容易滲透完整的活細(xì)胞，并被困在溶酶體內(nèi)。進(jìn)入溶酶體后，其熒光顯著增強(qiáng)。這一關(guān)鍵特征顯著降低了其染色背景，使其可用于多種研究，包括細(xì)胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細(xì)胞活力，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。該套件提供所有必要組件。 它適用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。

操作方法

1.準(zhǔn)備溶酶體染色溶液：

1.1解凍LysoBrite NIR（組分A）至室溫。

1.2通過將20μLLysoBrite NIR（組分A）稀釋到10mL活細(xì)胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。

注1：對于一個(gè)96孔板，20μLLysoBrite NIR（組分A）就足夠了。 將未使用的LysoBrite NIR（組分A）等分并儲存在<-20℃。 避光，避免反復(fù)凍融循環(huán)。

注2：熒光溶酶體指示劑的最佳濃度根據(jù)具體應(yīng)用而變化。 可以根據(jù)特定細(xì)胞類型和細(xì)胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準(zhǔn)備和染色細(xì)胞：

2.1對于粘附細(xì)胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到所需的匯合時(shí)，加入等體積（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細(xì)胞在37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。使用配有Cy5濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

注意：如果細(xì)胞看起來沒有充分染色，建議增加標(biāo)記濃度或孵育時(shí)間以使染料積累。

2.2對于懸浮細(xì)胞：以1,000rpm離心細(xì)胞5分鐘以獲得細(xì)胞沉淀并吸出上清液。在預(yù)熱的生長培養(yǎng)基中輕輕重懸細(xì)胞沉淀，然后加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細(xì)胞在37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。使用配有Cy5濾光器的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

注1：如果細(xì)胞看起來沒有充分染色，建議增加標(biāo)記濃度或培養(yǎng)時(shí)間以使染料積累。

注2：懸浮細(xì)胞可以附著在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為貼壁細(xì)胞染色（見步驟2.1）。