Cell Meter磷脂酰絲氨酸凋亡檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光,適合微孔板檢測(cè)*是通過檢測(cè)PS的翻轉(zhuǎn)來測(cè)定細(xì)胞凋亡。在凋亡細(xì)胞中，PS從胞內(nèi)移位到胞外表面，因此PS出現(xiàn)在細(xì)胞的外表面可以作為細(xì)胞凋亡的起始或者中間階段的通用指示器，也可以通過其形態(tài)學(xué)改變來測(cè)定。該試劑盒使用我們獨(dú)有的紅色熒光Apopxin PS傳感器特異性的結(jié)合PS，其親和性高于Annexin V(Kd<10nM)。該試劑盒使用的PS傳感器結(jié)合膜上的PS后，發(fā)出紅色的熒光。因?yàn)榕cPS的高親和性，該試劑盒比其它基于Annexin-V，僅能用熒光顯微鏡和流式檢測(cè)凋亡的試劑盒更穩(wěn)定，并且本試劑盒除上述兩種儀器外還能使用熒光酶標(biāo)儀。

溶液配制

工作溶液配制

將10 μL Apopxin?Red（組分A）加入1 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成Apopxin?Red工作溶液。

操作步驟

1.通過向PBS或所需的緩沖液中加入10X /孔（96孔板）或2.5 μL /孔（384孔板）的10X測(cè)試化合物儲(chǔ)備溶液來處理細(xì)胞。 對(duì)于空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基），添加相同量的化合物緩沖液。

2.將細(xì)胞板在5％CO2、37°C的培養(yǎng)箱中孵育所需的時(shí)間（對(duì)于喜樹堿處理過的Jurkat細(xì)胞，需要4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)凋亡。

3.在每個(gè)孔中加入100 μL /孔（96孔板）或25 μL /孔（384孔板）的Apopxin?Red工作溶液。

4.在避光條件下，于室溫下孵育細(xì)胞板至少1小時(shí)。

5.以800 rpm的速度離心細(xì)胞板（特別是非粘附細(xì)胞）2分鐘（制動(dòng)）。

6.使用熒光酶標(biāo)儀（Ext / Em = 590/630 nm（截止= 610 nm））或使用帶有TexasRed?濾光片的熒光顯微鏡對(duì)圖像池進(jìn)行熒光強(qiáng)度監(jiān)測(cè)。