MycoLight 快速熒光細(xì)菌革蘭染色試劑盒為測(cè)定活細(xì)菌中的革蘭標(biāo)志提供了一種簡(jiǎn)單方便的方法。革蘭染色是臨床和研究環(huán)境中常用的方法，用于將細(xì)菌物種分類分類為兩大類。但是，傳統(tǒng)的革蘭染色方法是繁瑣的并涉及細(xì)菌固定，如果要進(jìn)一步表征細(xì)菌，這可能是一個(gè)顯著的缺點(diǎn)。 MycoLight 快速熒光細(xì)菌革蘭染色試劑盒為活細(xì)菌提供一步革蘭染色分析，克服了傳統(tǒng)革蘭氏染色分析中固有的問(wèn)題。 MycoLight 快速熒光細(xì)菌革蘭染色試劑盒使用兩種DNA染料MycoLight Green和MycoLight Red，具有染色革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌的差異能力。 MycoLight Green染色革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌，而MycoLight Red優(yōu)先標(biāo)記革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。這兩種染料的激發(fā)/發(fā)射最大值對(duì)于MycoLight Green為約484 / 504nm，對(duì)于MycoLight Red為518 / 600nm。因此，當(dāng)用染料染色革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌的混合物時(shí)，革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌將發(fā)出紅色熒光，革蘭氏陰性細(xì)菌將發(fā)出綠色熒光。革蘭氏陽(yáng)性和陰性染色可分別用TRITC和FITC濾光片組進(jìn)行熒光監(jiān)測(cè)。

樣品示例及操作

1.細(xì)菌樣品的制備

1.1準(zhǔn)備濃度約為10⁷cells / ml的細(xì)菌樣品。 在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中使細(xì)菌生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)后期。 注意：在波長(zhǎng)= 600 nm（OD600）處測(cè)量細(xì)菌培養(yǎng)物的光密度，以確定細(xì)胞數(shù)。 對(duì)于大腸桿菌培養(yǎng)，OD600 = 1.0等于8 x 10⁸細(xì)胞/ ml。

1.2通過(guò)以10,000 x g離心10分鐘除去培養(yǎng)基，然后將沉淀重新懸浮在ddH₂O中，將細(xì)菌濃度調(diào)節(jié)至?10⁷細(xì)胞/ ml。

2.染色方案

2.1向100 μL細(xì)菌懸液中加入2 μL MycoLight 染料工作溶液。

2.2充分混合并在室溫下于黑暗中孵育15分鐘。

2.3用熒光顯微鏡通過(guò)FITC（Ex / Em = 488/530 nm）通道監(jiān)測(cè)革蘭氏陰性細(xì)菌的熒光，并通過(guò)TRITC（Ex / Em = 540/620 nm）通道監(jiān)測(cè)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的熒光。 注意：該試劑盒僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)不同的細(xì)菌菌株或其他特定需求進(jìn)行優(yōu)化。 注意：該試劑盒中的革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的相對(duì)比例也可以通過(guò)熒光光譜法估算。